在免疫測定中，自由表面必須是封閉的。這對于許多方法是正確的，例如ELISA、蛋白質陣列、免疫PCR、蛋白質印跡或免疫組織化學。

優化后蛋白質或抗體可以有效地附著在酶標板或Westernblotting膜的表面。這樣，可以在具有高密度捕獲抗體或捕獲分子的表面上進行最佳分析。

這種優化的結果是，許多其他蛋白質或多肽可以附著在表面上。這種連接是可逆的。如果不密封表面，樣品中的分析抗體、示蹤劑、分析物或其他成分將會結合到表面上。這可能會導致錯誤的結果或高背景信號。即使沒有分析物，直接連接到酶標板孔上的檢測抗體也會產生信號。這必須停止。為了使每個表面的自由結合能力飽和，有必要將其密封。飽和是通過用致密分子層覆蓋表面以使該層沒有間隙來實現的。

ELISA板包被捕獲抗體(或抗原)后，表面的游離結合位點必須關閉。密封溶液含有高濃度的密封劑。孵化在微孔中進行。這導致封閉劑吸附到表面上的自由結合位點。理想情況下，產生完全致密且無間隙的層。孵育時間取決于封閉劑，并且可以非常短(如果使用非常好的封閉劑)。一般來說，建議使用較長的孵育時間，選擇合適的操作步驟。孵化時間通常為1-2小時或過夜。

密封后可繼續進行后續測定。除了密封步驟之外，建議使用LiquidPlateSealer來穩定封閉的板。這可以提高捕獲抗體與分析物的結合能力，并且可以在靈敏度和可重復性方面提高一些測定的結果。此外，未使用的包被酶標板可以儲存更長時間。穩定劑與封閉劑一起在ELISA板的孔中孵育。LiquidPlateSealer在捕獲的抗體或包被的抗原上覆蓋一層易于溶解的保護層。

這一層有兩個功能。首先，這一層可以直接改善許多捕獲的抗體或抗原的結構構象。在孵育和隨后的ELISA板干燥過程中發生構象改善。與未處理的捕獲抗體相比，此時的捕獲抗體具有更高的結合能力。當酶標板干燥后，其效果與包被的捕獲分子有關，可直接測量。第二個功能是包被的生物分子的長期穩定性。穩定后，酶標板可在4℃下長期保存。在大多數情況下，可以通過涂覆和儲存許多板來簡化實驗室的操作程序。穩定化也可用于降低ELISA突變的效率。LiquidPlateSealer的積極效果很大程度上取決于所用的生物材料(如抗體和抗原)。因此， 通常不可能基于單次檢測來量化積極效果。

沒有能適用于各種測定的完美封閉劑。封閉劑必須與相應的檢測方法相匹配，對于任何新的檢測方法都必須單獨選擇。對于針對蛋白質或肽結合而優化的平板和蛋白質印跡膜，基于蛋白質的封閉劑比其他封閉劑更有效。在大多數情況下，合成封閉劑的效率低于基于蛋白質或多肽的效率。

BSA-Block是基于BSA的經典封閉劑。牛血清白蛋白是最重要的蛋白質之一，具有良好的純度和適量，可用于研究和應用。因此，它長期以來被用作免疫測定中的封閉劑。在使用的許多測定方法中，它有可靠的驗證記錄。BSA-Block產品是由經過認證的公司從純化的BSA中生產的。像所有基于BSA的解決方案一樣，密封效果不是最佳的。BSA是一種蛋白質，體積太大，無法構建一個密度最好的層。但是對于大多數分析來說，這是可以接受的，對于一些分析來說，BSA是最好的封閉劑。一些抗體僅在BSA存在下顯示出最佳結合效率。有些抗體可以包被為包被抗體，然后用BSA封閉，效果最好。對于某些抗體來說，BSA-Block比任何其他封閉劑都顯示出更好的結果， 因為它對捕獲抗體有直接的積極作用。結合隨后與作為包被抗體穩定劑的LiquidPlateSealer一起孵育，可以顯著提高BSA對抗體的正效應。與合成封閉劑相比，BSA具有優異的封閉效果，但低于新型封閉劑。

為了獲得良好的產品性能、可重復性和經濟性，開發了許多檢測方法。對于這種檢測，CANDOR開發了一種基于肽的封閉劑SmartBlock。批次之間的一致性相當于合成密封膠的高一致性。作為一種基于肽的封閉劑，SmartBlock可以很好地結合表面，也可以結合抗體或蛋白質。此外，肽的化學優化增強了在蛋白質結合表面上的結合。因此，與許多其他密封劑相比，它的密封效果更好。然而，它是一種經濟的產品，也可用于生產蛋白質印跡和ELISA試劑盒。SmartBlock是免疫分析和應用中最有效的封閉劑。

多年來，酪蛋白在文獻中被描述為合適的封閉蛋白。酪蛋白的封閉效率通常優于BSA。酪蛋白提供了許多商業上可獲得的阻斷劑。在生產過程中，通常將酪蛋白溶解，過濾除去不溶成分。CANDOR提供酪蛋白基封閉劑-TheBlockingsolution。但是，這種密封劑不能與其他制造商提供的常規酪蛋白密封劑相比。CANDOR開發的專利生產工藝對高純度酪蛋白進行了化學改性。在生產過程中，改性酪蛋白被打碎。結果，獲得了具有寬且一致的光譜范圍的不同大小片段的改性酪蛋白溶液。雖然制作過程比較困難，但是批次之間的一致性還是很好的。每批封閉溶液的測定結果相同。因此， 允許在GLP實驗室中常規使用，或在具有極低檢測限的現代診斷產品中使用，如現代生物標志物的診斷。獨特的生產技術帶來極其有效的特性密封劑。

與BSA等替代封閉劑相比，該試劑極高的封閉效果可通過測量變異系數(cv)輕松量化。通常，并不是每次測定都需要極高功效的封閉溶液。我們建議封閉解決方案用于需要準確、可靠和可重現的分析物定量分析的關鍵應用，以及稀有和珍貴樣品的分析。

我們建議您不要使用每批成分差異很大或可能被污染的封閉劑。有了這種封閉劑，你可以觀察變化的結果或取決于不同的批次背景。這種封閉劑的使用不適用于GLP實驗室和其他標準化區域或人類診斷試劑盒的生產。在這些地區，不允許改變純度，這將意味著每批產品的廣泛驗證。

這些不當封閉劑包括奶粉基封閉劑和一些市售封閉劑，如魚基提取物和許多其他動物基提取物。至于奶粉，需要提到的是，奶粉只是食品，不是實驗室使用的化學品。奶粉可能是最便宜的密封劑，但只有在污染導致的結果可變或不明確的情況下才使用。奶粉作為一種廉價的封閉劑，應該合理使用，用于一些研究領域的測定，也可以用于大學的教學實驗。

總之，每種檢測方法都需要尋找和找到合適的封閉劑。在選擇合適的封閉劑之前，必須明確測定質量或結果質量的重要性。如果是珍貴的樣品或者需要可靠的結果(比如法規要求)，一定要注意密封效率高。如果對結果質量要求不高，也可以使用簡單的封閉劑。如大學或學院的教學培訓分析，奶粉待遇沒有問題。